X-连锁无丙种球蛋白血症（XLA）；Burton酪氨酸激酶（BTK）；诊断；治疗
X-linked agammaglobulinemia（XLA ）belongs to the primary immunodeficiency psease（PID），which calls Bruton psease.Recently，it can not generate immune globulin，because of the mutation of the Bruton’s agammaglobulinemia tyrosine kinase （BTK） gene，which leads to developmental psorder of the B cell.This article reviews the genetic characters，mutation analysis，molecular pathogenic mechanism and therapy of the BKT gene.
XLA；BTK；pagnosis；therapy
X连锁无丙种球蛋白血症（X-linked agammaglobulinemia，XLA），又称Bruton无丙种球蛋白血症，是最早发现的人类原发性免疫缺点病（primary immunodeficiency psease，PID）之一，Bruton（1952年）初次报道。病人临床上以反复细菌感染为特点，血清中各类免疫球蛋白明显减少或缺少，对抗原刺激不可以产生抗体应答，血循环中B淋巴细胞降低，淋巴结及淋巴组织缺少生发中心和淋巴滤泡，骨髓中无浆细胞，但前B淋巴细胞数目正常，T淋巴细胞数目及功能正常。典型病例为出生后半年左右开始反复化脓感染（如肺炎链球菌或嗜血流感杆菌）或迟至幼年发病，病人体内缺少成熟B细胞，基本上不可以自主产生免疫球蛋白，需要依赖免疫替代疗法保持体液免疫水平。该病紧急风险病人健康，危及病人生命。80%～90%［1］临床诊断病例可检出有关致病基因BTK发生突变，而其他10%～20%［1］的患者存在其他问题，有研究显示常染色体编码Igφ［2，3］、μHC［4］和LC的基因存在突变。
1 BTK的遗传学特质大部分PID的遗传形式已经明确，几乎均为单基因遗传，多数为常染色体隐性遗传，第二为X连锁隐性和常染色体显性遗传。大部分状况男士发病，女人携带，但也有男士携带者不发病的报道。60%的PID突变基因的DNA序列已被克隆，突变位点（包含突变基因定位的染色体节段和基因位点）和突变形式（单个核苷酸缺失、替代、插入、移码突变、无义或错义突变等）也已确定［5］。在WHO PID专家委员会的指导下，成立了有关疾病基因库，记录登记全球范围的PID基因突变及其种类。多基因遗传性PID的确定较困难，到今天尚无确切的报道。
1.1 BTK的蛋白结构 BTK蛋白为B细胞信号传递系统中的要紧蛋白，是非受体型蛋白酪氨酸激酶Tec家族的一员，该家族的成员还包含TEC、ITK/TSK/EMT和BMX。Tec家族蛋白酪氨酸激酶包含5个不一样的结构区段（见图1），从N末端起为PH（pleckstrin homology；PH）段，约有120个氨基酸，TH（Tec homology；TH）段约有60～80个氨基酸SH3（Src homology3;SH3）段约有60个氨基酸，SH2段约100个氨基酸，激酶催化段约280个氨基酸［6］。
图1 BTK蛋白的组成（从N端开始）包含5个地区：PH、TH、SH3、SH2和激酶区。
注：图上边的数字代表各段的氨基酸长度，图下边的数字代表不一样的外显子及其相应的地方。
BTK蛋白的空间结构多数已测明，包含PH区、TH区的前半部、SH3区和激酶催化区［7］，SH2区的结构可借用其他蛋白激酶的类似结构进行研究。这类三维空间结构可用于剖析突变导致的蛋白空间结构的改变。
1.2 BTK基因的分子结构及其突变剖析 在20世纪80年代，多位学者应用DNA多态性标志剖析的办法，成功地将XLA的缺点基因定坐落于X染色体中部（Xq21.3-22）的2cm地区内［8］。Vetrie等用定位克隆办法在XLA病变基因区内离别鉴别了一个新的基因，该基因表达于正常人各期B淋巴细胞，在XLA病人中发生突变，故觉得是XLA的致病基因。Tsukada等也找到XLA的KD致病基因。BTK基因全长37.5kb，含有19个外显子，除第一外显子外，其余18个编码BTK蛋白的659个氨基酸，分子量为76KD［9］。cDNA含有2560个核苷酸，有一个编码659个氨基酸多肽的开放阅读框架，起始密码子在核苷酸第133地方上，在起始地方上游的15个密码子处阅读框架闭合。依据国际研究小组BTK突变剖析，迄今已经在471个家族544个XLA患者中发现了BTK基因341个独立存在的碱基置换、插入或缺失，其中有13个大段缺失和2个大段插入。突变不只存在于19个外显子，还涉及内含子和启动地区。其中，发生频率最高的是错义突变，第二是无义突变和拼接位点突变。错义突变主要发生在三联体密码子的前两位。外显子8和9的185~287位没错义突变，这类位点可能不容易突变或是功能上无关紧要。33%的替代累及CPG双核苷酸，这是现在觉得的最容易见到的突变热门［10］，而突变高频位点R520也是CPG突变［6］。编码外显子蛋白突变的地区［11］（见表1）。表1 编码外显子蛋白突变的地区
2 BTK的分子致病机制BTK是非受体酪氨酸蛋白激酶，该类激酶广泛参与细胞信号传导，影响细胞的存活、增殖和分化，BTK是B细胞发育成熟的重点原因。正常人除T细胞和浆细胞外均有BTK表达，而BTK基因突变只影响B细胞的数目，这说明BTK在B细胞的成长发育过程中起着至关要紧有哪些用途。现在对BTK参与细胞信号传导研究比较了解的是BCR交联介导的信号传导渠道。其过程简述如下：BCR交联激活Pl-3激酶并产生少量的Pl-3，4，5-risphosphate与膜结合，Pl-3，4，5-risphosphate与BTK的SH3段用途使其定坐落于细胞膜。然后，BTK经过两步活化：第一BTK激酶段Y551位磷酸化（非常可能是与Lyn用途），接着是SH3段Y223位的自己磷酸化。活化后的BTK与B细胞衔接蛋白（BLNK）结合并激活phospholipase C -γy（PLC-γ），致使钙离子通道打开，胞外钙离子内流。该信号传导渠道最后致使细胞增生加大和转录的变化。此模式仅限于以B细胞受体交联作为刺激信号，至于前B细胞受体交联是不是也引起相同的信号传导现在还缺少证据［1，12］。该信号传导渠道受FcRⅡB和SHIP（ SH2-containing inositol-5-phosphatase）磷酸酶介导的另一渠道制约，通过水解Pl-3，4，5-risphosphate和Ins（1，3，4，5）-etraphosphate关闭钙离子内流通道［13］。BTK不仅能够由BCR和FCR介导激活，也可以通过其他不少受体激活，包含G-protein-coupled receptors（ GPCR）、IL-3、IL-5和IL-6，另外，CD19和单克隆抗体的交联也可激活BTK［13］，近年来研究表明，CD40也是B细胞发育过程中的要紧受体，传递刺激信号影响细胞存活、成长和分化。与BCR介导的BTK活化渠道相似，CD40的交联也可激活BTK。CD40和BCR可能是B细胞发育过程中不同阶段激活BTK的信号传递通路。但也有研究提示CD40不通过BTK也可提升NFKB和JNK的水平，是独立于BTK的信号传导通路［14～16］。BTK在细胞内与不少分子相互用途，一同构成了一种微环境，在信号传导的过程中起着要紧有哪些用途。这类分子分别与BTK的不同区段相互用途，其中与PH段用途的分子研究得不少，R28附近地区与PIP3、IP4、PKCβⅠ、BP-135、F-ac-tin、STAT3和Fas用途。PH- TH地区与Gαq和Gβ双体用途;SH3与c-Cb1、WASp、Vav和sab用途;SH2与磷酸化的BLNK用途。另外，SH3与TH在BTK分子内用途，抑制BTK的活性。在BCR交联介导的信号传导渠道中，Syk和BLNK对BTK的活化起正向调节用途，磷酸化的PKCs、sab和IBTK对BTK的活化有抑制用途。尽管与BTK用途的分子不少，但它们怎么样协调地与BTK用途，完成BTK参与的信号传导，机制现在尚不了解［17，18］。
3 XLA的诊断XLA是一种原发性体液免疫缺点症，风险着大家的健康。因而，对该症进行产前诊断和女人携带者的鉴别就看上去十分要紧［19］。为了研究XLA家系女人成员的状况，Fearon等使用了X染色体失活的办法去发现携带情况与验证B淋巴细胞发育的内在缺点。依据这一办法用重组DNA探针同时发现RFLP和X染色体基因甲基化。在无携带状况的女人的外周血粒细胞、T淋巴细胞和B淋巴细胞中发现X染色体的随机失活。相反，该症的三个携带者在外周B淋巴细胞两个X染色体中的一个优先失活，但不是T细胞或粒细胞。这一发现强烈地支持XLA是由B淋巴细胞发育的内在缺点所致的假设。Lovering （1994）等［20］对BTK基因缺失病人DNA分子斑点杂交剖析见到了已改变的DNA限制性片段，并对7个病人家庭用已经改变的限制性片段办法对与病人有关的女人携带情况作出诊断。随后，Schuster等［21］报道了对所有19个外显子。包含侧翼内含子边界使用PCR-SSCP办法成功地测试到两例男士患儿BTK的SH2功能区的新突变，并用一个已改变过的第一个引物做PCR扩增突变发生，作出三代中健康女人携带者的鉴别。接着，Hagemann等［22］对一个散发的XLA患儿及家庭的三代成员应用PCR扩增基因组DNA，使用序列剖析的办法直接鉴别XLA的基因突变，结果诊断出患儿及其免疫学表现正常的女人携带者。以上这类办法均可应用于产前诊断。这无疑对优生优育是非常有意义的。
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